Optimisation de la conservation du sperme de lapin : congélation et réfrigération

Abstract

Le procédé de réfrigération et de congélation altère la qualité du sperme du lapin et compromet son utilisation à grande échelle. L’optimisation des milieux de conservation (dilueurs) qui peuvent protéger efficacement les spermatozoïdes reste ainsi d’une importance capitale. Ainsi, l’objectif de la présente thèse est d’explorer les effets du cholestérol et de la vitamine, les deux solubilisés dans les cyclodextrine, Cholesterol-Laoded-Cyclodextrins (CLC), α-Tocophérol-Laoded-Cyclodextrins (TLC) , respectivement, et la Vitamine C (VitC) , et ceci aussi bien dans la conservation par réfrigération à 4°C que dans la congélation à -196°C dans l’azote liquide. Le sperme à été traité à 4°C avec 2.5mg CLC, 0.625mg TLC et 0.125mg VitC et par différentes combinaisons (CLC+TLC, CLC+VitC, TLC+VitC et CLC+TLC+VitC)/80-100million SPZ. Le sperme congelé a été traité avec 0.35mg de β-cyclodextrins (Cdx), 2mg de Cholestérol (Chl), 0.06mg d’α-tocophérol (Toc), 5.4mg CLC, 0.46mg TLC et 2.7+0.23mg CLC+TLC/80-100million SPZ. Nous avons ensuite analysé la mobilité par un Système CASA (Computer assisted semen analysis) et nous avons mesuré le statut oxydatif du sperme réfrigéré par mesure de la peroxydation lipidique (TBARS), le pouvoir réducteur du radical ABTS et le pouvoir scavenger à l’égard du H2O2. Les résultats ont montré que le CLC et TLC améliorent de manière significative (p <0,05) les paramètres de motilité après 24h de conservation à 4°C et en post-décongélation. La VCL et la VAP du TLC (55.2±21.1, 31.2±13.3 µm/s) sont significativement plus élevées après 24h à 4°C en comparaison avec le contrôle (VCL 48.5±19.6, VAP 26.4±12.3 µm/s) et la VAP de 48h (25.5±10.5 µm/s) est également supérieure à celle du contrôle (20.9±10 µm/s). Pour la congélation (-196°C), le TLC augmente significativement la VCL et la VAP comparativement au contrôle (31.1±0.9, 13.5±0.5 µm/s vs 23.2±0.8, 10.1±0.5 µm/s). En ce qui concerne le statut oxydative du sperme réfrigéré, aucune différence significative n’a été notée pour l’ihnibtion de l’ABTS et du H2O2, alors que CLC a enregistré au test TBARS (1.7-±0.7 nmol/ml) des valeurs significativement plus élevées que le contrôle (1.12±0.3 nmol/ml), VitC (0.9±0.2 nmol/ml) et TLC. En conclusion, nous pouvons retenir que les molécules actives complexées aux cyclodextrines ont amélioré la qualité du sperme aussi bien en réfrigération qu’en congélation, en augmentant essentiellement leur solubilité