Caractérisation phénotypique et génotypique de cryptosporidium chez les ruminants et stratégies thérapeutiques

Abstract

Résumé : Cryptosporidium est un parasite protiste intracellulaire mais extra-cytoplasmique obligatoire qui infecte un large éventail d'hôtes vertébrés et cause une maladie intestinale importante chez les animaux et chez l'homme. Le but de cette étude était de détecter et de caractériser Cryptosporidium spp. dans des échantillons fécaux de veaux et d’agneaux naturellement infectés en Algérie. Un total de 65 et 83 échantillons fécaux de veaux et d’agneaux (âgés de moins de 3 mois) a été recueilli dans 12 et 14 fermes d'élevages de vaches laitières et de bergeries respectivement, dans quatre régions répartis sur huit wilayas. La présence de Cryptosporidium a été établie par une méthode d’immunofluorescence (IF). Des échantillons positifs ont ensuite été analysés par PCR-ARNr 18S et PCR-RFLP afin de déterminer les espèces présentes. Les échantillons positifs pour Cryptosporidiumparvum ont été sous-typés via un séquençage des produits d’amplification du gène gp60. L’étude microscopique à l’immunofluorescence a révélé la présence d’oocystes de Cryptosporidium dans 40/65 (62%) et 36/83 (43%) respectivement chez les veaux et les agneaux. Les résultats de l’analyse PCR-gp60 a montréla présence de C. parvum, C. bovis et C. ubiquitum. L’étape du sous-typage des isolats de C. parvum a révélé deux familles du génotype, IIa et IId. Quatre sous-types ont été reconnus dans la famille IIa (IIaA15G2R1, IIaA13G2R1, IIaA16G2R1 et IIaA21G2R1). Un sous-type majoritaire a été reconnu dans la famille IId, le sous-type IIdA16G1. Ces résultats illustrent la forte présence de Cryptosporidium chez les ruminants et augmentent la diversité des isolats de C. parvum avec la première description des sous-types IIaA15G2R1 et IIdA16G1 en Algérie. La présence de familles de sous-types zoonotiques de C. parvum (IIa, IId) dans cette étude suggère que les ruminants constituent probablement un important réservoir de C. parvum zoonotique. Il n'existe actuellement aucun traitement disponible totalement efficace contre la cryptosporidiose chez l'homme ou chez l'animal. Par conséquent, il existe un besoin critique pour le développement de nouveaux agents thérapeutiques. Afin de montrer l'activité "anticryptosporidienne" de deux polysaccharides naturels : chitosans ainsi que de la Paromomycine, nous avons étudié les effets de ces molécules sur C. parvum d’isolats bovin et ovin dans deux modèles in vitro (lignées HCT-8 et Caco-2) et in vivo (souris CD-1 nouveau-nés). Les tapis cellulaires ainsi que les souriceaux ont été inoculés avec des oocystes de C. parvum (isolats naturels), traités avec les molécules à tester et comparés à des témoins. La paromomycine, un médicament classique utilisé en médecine vétérinaire, a été utilisée comme composé de référence. Un test d’infectiosité des isolats a été effectué avant l’évaluation de ces molécules. Nos résultats ont montré l’apparition considérable de formes intracellulaires des parasites et des réductions significatives de ces formes intracellulaires des oocystes de Cryptosporidium. En outre, la paromomycine, et les chitosans inhibent de manière significative la multiplication du parasite dans les cellules HCT-8 et Caco-2 (P <0,05). Dans les études in vivo, le traitement avec chitosans ou du sulfate de paromomycine a considérablement réduit l'excrétion parasitaire chez les souris nouveau-nées infectées. En conclusion, ces résultats constituent la première preuve in vitro et in vivo des activités anti-cryptosporidiennes de ces polysaccharides naturels sur des isolats de terrain de Cryptosporidium